Оценка функциональной активности NK-клеток с использованием проточной цитометрии
В качестве метки для КМ применяют флуоресцентный краситель 5-, 6-карбоксифлуоресцеин диацетатсукцинилмидиловый эфир (КФДЭ), который образует прочную ковалентную связь с внутриклеточными белками и в используемой концентрации не влияет на жизнеспособность клетки.
Первоначально нефлуоресцирующий КФДЭ проникает через клеточную мембрану. Карбоксифлуоресцеины связываются с внутриклеточными молекулами, формируя конъюгаты, обеспечивая стойкое флуоресцентное окрашивание клетки. Окрашенные таким образом КМ К-562 смешивают с КЭ и инкубируют в течение нескольких часов. После окончания культивирования клетки окрашивают пропидий йодидом для определения убитых в ходе реакции КМ. По количеству убитых К-562 определяют активность NK-клеток. Анализ проводят на проточном цитофлуориметре и определяют количество КМ, включивших КФДЭ (зеленое свечение), и количество убитых клеток, включивших пропидий йодид (красное свечение).
Еще по теме Оценка функциональной активности NK-клеток с использованием проточной цитометрии:
- Оценка цитотоксической активности с использованием проточной цитометрии
- Выделение клеток методом проточной цитометрии
- ОЦЕНКА ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ ФАГОЦИТОВ
- ГЛАВА З МЕТОДЫ ИЗУЧЕНИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ КЛЕТОК ИММУННОЙ СИСТЕМЫ IN VITRO И IN VIVO
- Применение метода проточной цитометри
- Количественное определение субпопуляций лимфоцитов с помощью проточной лазерной цитометриис использованием моноклональных антител
- Метод оценки хемотаксиса нейтрофилов с использованием камеры Бойдена
- Количественная оценка антителообразующих клеток (метод Йерне)
- Определение цитотоксической активности NK-клеток
- ОЦЕНКА ПРОЛИФЕРАТИВНОЙ АКТИВНОСТИ ЛИМФОЦИТОВ
- Вмешательство в активность раковых клеток в костях
- Лабораторная работа 3-4 Оценка фагоцитарной активности лейкоцитов человека