<<
>>

Особенности постановки методов оценки хемотаксиса in vitro

Хотя метод довольно прост, необходимо остановиться на некоторых технических особенностях, способных существенным образом повлиять на миграционную активность и количество клеток, помещаемых в камеру.

Так как хемотаксис связан с высокой метаболической активностью клеток, необходимо соблюдать определенный температурный режим. Максимальный хемотаксис наблюдается при 37 °С. В интервале температуры от 33 до 43 °С значительных различий результатов миграции не наблюдается. Однако при экспериментальной гипотермии у свинок при температуре 29 °С отмечено снижение миграционной активности моноцитов.

Состав среды, используемой при постановке метода, не требует каких-либо специальных добавок за исключением небольшого количества белка, облегчающего миграцию клеток. Наиболее оптимальный pH среды — 7,0, хотя в некоторых случаях предпочтение отдается некоторому смещению pH в кислую сторону, что обычно характерно для воспалительной реакции in vivo. Как указывалось выше, моноциты, проходящие сквозь фильтры, могут попадать в раствор нижней камеры, и поэтому их не учитывают.

Важное значение имеет время проведения реакции. При использовании поликарбонатных фильтров оптимальные сроки инкубации клеток при 37 °С — 90 мин.

Следует избегать добавления в систему нативных сывороток. Например, сыворотка человека порой содержит факторы как способствующие хемотаксу, так и его ингибирующие.

Важна также криоконсервация выделенных моноцитов. В отличце от всех других функций клеток хемотаксис у размороженных МОНОЦИТОВ снижен. Присутствие лимфоцитов в клеточной суспензии, загружаемой в камеру, обычно не влияет на хемотаксис моноцитов.

При соблюдении стандартных условий постановки реакции техническая вариабельность результатов составляет около 20%, что вполне допустимо. Воспроизводимость метода весьма высокая. Рекомендуется подсчитывать при микроскопии как минимум до случайных полей миграции на 2 идентичных фильтрах. Если перед помещением на фильтры камеры моноциты были хорошо суспендированы, разбросы подсчета клеток в отдельных полях зрения под микроскопом невелики и связаны обычно только с ошибками при самом подсчете.

В следующем разделе мы уделяем внимание ряду методических приемов оценки активности фагоцитарных клеток в генерации многочисленных медиаторных молекул (в первую очередь ЦИТОКИНОВ и активных форм кислорода и азота). Все эти факторы врожденного иммунитета крайне важны для нормального функционирования иммунной системы, а особенно — для выявления патологических состояний, характеризующихся сниженной или повышенной выработкой подобных медиаторов.

<< | >>
Источник: Ковальчука, Г. А. Игнатьевой, Л. В. Ганковской. Иммунология : практикум : учеб, пособие. — М.: ГЭОТАР- Медиа,2010. 2010

Еще по теме Особенности постановки методов оценки хемотаксиса in vitro:

  1. Метод оценки хемотаксиса нейтрофилов с использованием камеры Бойдена
  2. ГЛАВА З МЕТОДЫ ИЗУЧЕНИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ КЛЕТОК ИММУННОЙ СИСТЕМЫ IN VITRO И IN VIVO
  3. Лабораторная работа 2-2 Постановка метода Рекалде
  4. Постановка реакции выявления АОК (метод Н. Йерне)
  5. ГЛАВА 7 МЕТОДЫ ОЦЕНКИ СИСТЕМЫ ЦИТОКИНОВ
  6. Количественная оценка антителообразующих клеток (метод Йерне)
  7. МЕТОДЫ ОЦЕНКИ СИСТЕМЫ ЦИТОКИНОВ
  8. Методы оценки иммунометаболических показателей
  9. ХЕМОТАКСИС
  10. Определение содержания NO в супернатантах культуры фагоцитов in vitro
  11. Непосредственная постановка реакции
  12. ОСОБЕННЫЕ ДЕТИ И ОСОБЕННЫЕ РОДИТЕЛЬСКИЕ ЧУВСТВА. Наследники трона (единственные)
  13. АНАТОМО-ФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ КОЖИ У ДЕТЕЙ. ОСОБЕННОСТИ СТРОЕНИЯ КОЖИ И ЕЕ ПРИДАТКОВ
  14. Оценка киллинга фагоцитов