<<
>>

Непосредственная постановка реакции

1. Забивают мышей и фиксируют их на столике.

2. Выделяют селезенку.

3. Готовят суспензию клеток в 3 мл среды 199 и подсчитывают число ядросодержащих клеток в суспензии.

4.

Готовят разведение клеток с концентрацией 50х106 и ЮхЮ6 в 1 мл.

5. Готовят смесь агара, эритроцитов барана и клеток селезенки. Для этого в пробирки с 2 мл агара, находящиеся в водяной бане при 45 °С, добавляют 0,1 мл 10% суспензии эритроцитов барана и 0,1 мл суспензии клеток (конечная концентрация клеток — 5х106 и 1х106).

6. Разливают смесь в чашки Петри. Смесь из пробирок выливают на теплые чашки Петри. Быстрыми круговыми движениями смесь равномерно распределяют по дну чашки. Чашки ставят на горизонтальный столик. Дают агару застыть.

7. Инкубируют чашки Петри в термостате при 37 °С в течение 60 мин.

8. Разведение комплемента: сухой комплемент морских свинок разводят средой 199 (на 1 ампулу 5 мл среды, получают 20% раствор).

9. В каждую чашку Петри аккуратно добавляют по 3 мл комплемента.

10. Инкубируют чашки Петри в течение 30 мин при 37 °С.

11. Оценивают реакцию.

12. Подсчитывают число бляшкообразующих клеток на чашку и пересчитывают на 1 млн клеток и на всю селезенку.

13. Микроскопия бляшек: находят бляшку с лизированным участком и бляшкообразующей клеткой в центре.

14. Для улучшения контрастирования бляшек производят окраску препаратов (состав красителя: 10 мл 2% раствора бензидина в ледяной уксусной кислоте, 10 мл 5% Н202, 80 мл дистиллированной воды).

15. Для сохранения бляшек чашку Петри заливают 10% раствором формалина.

<< | >>
Источник: Ковальчука, Г. А. Игнатьевой, Л. В. Ганковской. Иммунология : практикум : учеб, пособие. — М.: ГЭОТАР- Медиа,2010. 2010

Еще по теме Непосредственная постановка реакции:

  1. Постановка реакции выявления АОК (метод Н. Йерне)
  2. Особенности постановки методов оценки хемотаксиса in vitro
  3. Лабораторная работа 2-2 Постановка метода Рекалде
  4. ВОЗДЕЙСТВИЕ НЕПОСРЕДСТВЕННО НА ВНУТРЕННИЕ ОРГАНЫ - ПЕРСПЕКТИВНЫЙ ПУТЬ ОЗДОРОВЛЕНИЯ.
  5. Нельзя делать прививки непосредственно перед поступлением в садик
  6. Действия, когда непосредственная угроза для жизни пациента отсутствует
  7. ВОЗДЕЙСТВИЕ НЕПОСРЕДСТВЕННО НА ВНУТРЕННИЕ ОРГАНЫ - ПУТЬ, РЕАЛЬНО ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ БОЛЬНЫМИ, НО НЕ ЗДОРОВЫМИ ЛЮДЬМИ.
  8. АНАФИЛАКТОИДНАЯ РЕАКЦИЯ
  9. Реакции:
  10. Ощущение и реакция