<<
>>

Лабораторная работа 3-5 Получение супернатанта, содержащего цитокины и другие биологически активные молекулы из моноцитов периферической крови человека

1. Мононуклеарные клетки (МНК) выделяют из периферической крови путем центрифугирования в градиенте плотности фиколл- верографина. Затем клетки ресуспендируют в среде RPMI 1640, содержащей 2-меркаптоэтанол (5х10-5 М), с конечной концентрацией 1х106 клеток в 1 мл.

2. В каждую лунку 24-луночного планшета помещают 1 мл клеточной взвеси МНК и инкубируют в течение 60 мин при 37 °С для получения фракции прилипающих моноцитов. Надосадочную жидкость, содержащую лимфоциты, удаляют.

3. В опытные лунки с прилипшими моноцитами добавляют ЛПС (Е. coli), растворенный в RPMI 1640 до конечной концентрации 10 мкг/мл, а в контрольные лунки — равный объем среды RPMI 1640.

4. Через 24 ч культивирования при 37 °С в атмосфере 5% С02 проводят центрифугирование при 400 g в течение 8 мин при комнатной температуре; надосадочную жидкость, содержащую цитокины, собирают, стерилизуют фильтрованием (0,2 мкм) и хранят при -20 °С.

5. Супернатант, полученный таким способом, можно использовать для определения концентрации различных цитокинов (провос- палительных, противовоспалительных, колониестимулирующих факторов (КСФ) и др.), секретируемых МНК. Оценку цитокинов проводят методами биологического тестирования (см. гл. 7) или ИФА (см. гл. 4). Кроме того, можно определять содержание оксида азота, противомикробных пептидов и других биологически активных молекул.

<< | >>
Источник: Ковальчука, Г. А. Игнатьевой, Л. В. Ганковской. Иммунология : практикум : учеб, пособие. — М.: ГЭОТАР- Медиа,2010. 2010

Еще по теме Лабораторная работа 3-5 Получение супернатанта, содержащего цитокины и другие биологически активные молекулы из моноцитов периферической крови человека:

  1. Лабораторная работа 7-1 Определение биологической активности ИЛ-1 по комитогенному действию на пролиферацию тимоцитов мышей
  2. Лабораторная работа 3-4 Оценка фагоцитарной активности лейкоцитов человека
  3. Определение активности миелопероксидазы в лейкоцитах периферической крови
  4. Хемилюминесцентная активность нейтрофильных гранулоцитов крови у больных распространенным гнойным перитонитом и ее взаимосвязь с уровнями концентрации цитокинов
  5. ВОЗМОЖНОСТИ МЕХАНОХИМИЧЕСКОЙ ТЕХНОЛОГИИ В ПОЛУЧЕНИИ БЫСТРОРАСТВОРИМЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ И БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ДОБАВОК
  6. Лабораторная работа 7-3 Определение МИФ-активности
  7. Лабораторная работа 7-2 Определение активности интерферона
  8. Лабораторная работа 3-3 Определение фагоцитарной активности нейтрофилов и макрофагов
  9. Лабораторная работа 4-1 Определение уровня IgM, IgA и IgG в сыворотке человека методом радиальной иммунодиффузии
  10. МЕТОДЫ РАЗДЕЛЕНИЯ КЛЕТОК ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ
  11. ГЛАВА 2 МЕТОДЫ РАЗДЕЛЕНИЯ КЛЕТОК ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ