<<
>>

Лабораторная работа 3-3 Определение фагоцитарной активности нейтрофилов и макрофагов

1. Для получения нейтрофилов мышам вводят внутрибрюшинно 3—4 мл 2—3% раствора пептона и через 2 ч животных умерщвляют с помощью хлороформа. Их вскрывают в асептических условиях. Из брюшной полости с помощью шприца или пастеровской пипетки отсасывают жидкость, переносят ее в силиконизированные центрифужные пробирки.

2. После центрифугирования пробирок в течение 10 мин при 1000 об/мин осадок ресуспендируют в среде 199, подсчитывают число клеток в камере Горяева и доводят до концентрации 1—2х106/мл.

3. К клеткам добавляют равный объем бактерий (чаще всего Staphylococcus aureus, не содержащий белка А) или опсонизированно- го зимозана в соотношении 1:10 и инкубируют при 37 °С в течение 30 мин.

4. Бактерии предварительно должны быть опсонизированы мышиной сывороткой. Опсонизацию проводят в течение 10 мин при температуре 37 °С с последующим отмыванием.

5. После инкубации готовят мазок на предметном стекле, фиксируют его метанолом 20 мин и красят краской Романовского—Гимзы в течение 30—40 мин.

6. Учет результатов осуществляется микроскопически. В мазке при увеличении х90 с иммерсионной системой подсчитывают фагоцитарный индекс (процент фагоцитирующих нейтрофилов) и фагоцитарное число (количество поглощенных бактерии на 1 нейтрофил).

Для изучения фагоцитарной активности макрофагов на 3—4-е сутки после введения раствора пептона мышей умерщвляют (в соответствии с современными нормами биоэтики), вскрывают в асептических условиях и вводят внутрибрюшинно 5—8 мл среды 199, содержащей 10% сыворотки эмбриона коровы. После легкого массажа брюшной полости жидкость отсасывают. Полость можно промывать средой 199 несколько раз, объединяя в одну все полученные порции. Далее исследование ведется так же, как опыты с нейтрофилами (рис. 3.3, см. также цв. вклейку).

Рис. 3.3. Фагоцитоз зимозана макрофагом (конфокальная микроскопия и лазерная сканирующая конфокальная микроскопия): а — интактный макрофаг; б — макрофаг, захвативший зимозан (красный)

<< | >>
Источник: Ковальчука, Г. А. Игнатьевой, Л. В. Ганковской. Иммунология : практикум : учеб, пособие. — М.: ГЭОТАР- Медиа,2010. 2010

Еще по теме Лабораторная работа 3-3 Определение фагоцитарной активности нейтрофилов и макрофагов:

  1. Лабораторная работа 3-4 Оценка фагоцитарной активности лейкоцитов человека
  2. Лабораторная работа 7-2 Определение активности интерферона
  3. Лабораторная работа 7-3 Определение МИФ-активности
  4. Лабораторная работа 7-1 Определение биологической активности ИЛ-1 по комитогенному действию на пролиферацию тимоцитов мышей
  5. Лабораторная работа 4-1 Определение уровня IgM, IgA и IgG в сыворотке человека методом радиальной иммунодиффузии
  6. Лабораторная работа 3-5 Получение супернатанта, содержащего цитокины и другие биологически активные молекулы из моноцитов периферической крови человека
  7. Лабораторная работа 3-1
  8. Лабораторная работа 3-2
  9. Лабораторная работа 2-1
  10. Лабораторная работа 2-3
  11. Определение цитотоксической активности NK-клеток
  12. Определение активности миелопероксидазы в лейкоцитах периферической крови
  13. Лабораторная работа 2-2 Постановка метода Рекалде