<<
>>

Лабораторная работа 7-2 Определение активности интерферона

1. Взвесь диплоидных фибробластов плода человека на среде с 10% сывороткой эмбрионов коров (концентрация клеток — 15—20х106/мл) разливают в стерильные 96-луночные плоскодонные планшеты по 100 мкл в лунку и помещают в С02-инкубатор при температуре 37 °С.

2. После формирования полного монослоя из лунок удаляют ростовую среду и в каждую лунку добавляют по 100 мкл поддерживающей среды.

3. Титрование активности ИФН в исследуемых образцах проводят методом двукратных разведений на монослое фибробластов.

Одновременно с образцами в лунки вносят вирус энцефаломиелита мышей (ВЭМ) в дозе, вызывающей 100% поражение клеток через 48 ч после заражения.

4. Для контроля используют лунки с интактными (необработанными) клетками, зараженными вирусом.

В каждом исследовании в качестве референс-препаратов используют пробы референс-ИФН с известной активностью.

5. Планшеты с разведениями образца инкубируют 24 ч при температуре 37 °С в атмосфере с 5% содержанием С02.

6. Уровень активности ИФН определяют величиной, обратной значению максимального разведения тестируемого образца, задерживающего цитопатическое действие вируса на 50%, и выражают ее в единицах активности на 1 мл.

7. Для определения типа ИФН в систему добавляют антисыворотку против ИФНа, ИФНр или ИФНу. Антисыворотка отменяет действие соответствующего цитокина, что позволяет идентифицировать тип ИФН.

Определение биологической активности миграции ингибирующего фактора. В настоящее время сформировались совершенно новые представления о природе и свойствах МИФ, открытого в 60-х годах прошлого столетия в качестве медиатора клеточного иммунитета и много лет остававшегося без должного внимания (Bloom B.R., Bennet В., 1966; David J.R., 1966). Лишь в последние 10—15 лет стало ясно: МИФ представляет собой один из важнейших биологических медиаторов в организме с широким спектром биологических функций цитокина, гормона, фермента.

Действие МИФ на клетки-мишени реализуется через СБ74“-рецептор или через неклассический путь эндоцитоза.

МИФ рассматривают как важный медиатор воспаления, активирующий функцию макрофагов (выработку цитокинов, фагоцитоз, цитотоксичность и др.), а также как эндогенный иммунорегулятор- ный гормон, модулирующий глюкокортикоидную активность.

Накапливается все больше сведений о роли МИФ в патогенезе многих воспалительных заболеваний, включая сепсис, ревматоидный артрит (РА), гломерулонефрит и др. При РА значительно увеличена концентрация МИФ в жидкости пораженных суставов, коррелирующая с тяжестью заболевания. Под влиянием МИФ возрастает выработка провоспалительных цитокинов как макрофагами, так и синовиальными клетками.

Известны различные методы тестирования активности МИФ, когда мигрирующие клетки (клетки-мишени для МИФ) помещают в стеклянный капилляр (капиллярный тест), в каплю агарозы или в агарозный колодец.

Мы приводим сравнительно простой скрининговый метод, основанный на формировании на дне лунок 96-луночного плоскодонного планшета клеточных микрокультур (лейкоцитов или макрофагов), стандартных по площади и числу клеток, с последующим их культивированием в питательной среде и определением изменения площади этих микрокультур при действии МИФ (Суслов А.П., 1989).

<< | >>
Источник: Ковальчука, Г. А. Игнатьевой, Л. В. Ганковской. Иммунология : практикум : учеб, пособие. — М.: ГЭОТАР- Медиа,2010. 2010

Еще по теме Лабораторная работа 7-2 Определение активности интерферона:

  1. Лабораторная работа 7-3 Определение МИФ-активности
  2. Лабораторная работа 3-3 Определение фагоцитарной активности нейтрофилов и макрофагов
  3. Лабораторная работа 7-1 Определение биологической активности ИЛ-1 по комитогенному действию на пролиферацию тимоцитов мышей
  4. Лабораторная работа 3-4 Оценка фагоцитарной активности лейкоцитов человека
  5. Лабораторная работа 4-1 Определение уровня IgM, IgA и IgG в сыворотке человека методом радиальной иммунодиффузии
  6. Лабораторная работа 3-5 Получение супернатанта, содержащего цитокины и другие биологически активные молекулы из моноцитов периферической крови человека
  7. Лабораторная работа 3-1
  8. Лабораторная работа 3-2
  9. Лабораторная работа 2-1
  10. Лабораторная работа 2-3
  11. Определение цитотоксической активности NK-клеток
  12. Лабораторная работа 2-2 Постановка метода Рекалде
  13. Лабораторная работа 4-2 Твердофазный непрямой иммуноферментный анализ
  14. Лабораторная работа 1-1 Выделение органов и тканей иммунной системы
  15. Определение активности миелопероксидазы в лейкоцитах периферической крови
  16. Определение выработки активных форм кислорода и оксида азота
  17. ИНТЕРФЕРОНЫ
  18. Интерфероны
  19. ИНДУКТОРЫ ИНТЕРФЕРОНА