<<
>>

Лабораторная работа 3-2

КМ К-562 метят изотопом 3Н-уридином (1 мкКи/мл) и инкубируют 1 ч при 37 °С. Затем клетки трижды отмывают культуральной средой, содержащей 10% СЭК. Отмытые КМ выдерживают в культуральной среде 2 ч при 37 °С и отмывают еще раз с целью удаления 3Н-уридина, не включившегося в РНК КМ.

Готовят рабочую суспензию меченых КМ с таким расчетом, чтобы в 1 мл содержалось 1х106 КМ и 5 мкг панкреатической РНК-азы.

Цитотоксическую реакцию проводят в круглодонных 96-луночных микропланшетах. В каждую ячейку помещают по 100 мкл рабочей суспензии меченых КМ с РНК-азой и 100 мкл суспензии монону- клеарных клеток (рабочая концентрация — 1х107/мл). Используют различные соотношения КЭ:КМ — 100:1; 50:1; 25:1; 12,5:1. Клетки каждого разведения помещают как минимум в 3 лунки. В контрольных пробах меченые КМ инкубируют без мононуклеарных клеток.

Культуры инкубируют 14 ч при 37 °С и с 5% содержанием С02. После инкубации содержимое лунок переносят на фильтры с помощью собирателя клеток — харвестра. Фильтры высушивают, помещают в сцинтилляционную жидкость, проводят учет реакции с помощью р-счетчика. Показатель функциональной активности естественных киллеров выражают в виде индекса цитотоксичности (ИЦ), который определяют по формуле:

Среднее значение(иимп/мин в опыте)

Среднее значение(иимп/мин в контроле)

<< | >>
Источник: Ковальчука, Г. А. Игнатьевой, Л. В. Ганковской. Иммунология : практикум : учеб, пособие. — М.: ГЭОТАР- Медиа,2010. 2010

Еще по теме Лабораторная работа 3-2:

  1. Лабораторная работа 2-1
  2. Лабораторная работа 2-3
  3. Лабораторная работа 3-1
  4. Лабораторная работа 2-2 Постановка метода Рекалде
  5. Лабораторная работа 7-2 Определение активности интерферона
  6. Лабораторная работа 7-3 Определение МИФ-активности
  7. Лабораторная работа 3-4 Оценка фагоцитарной активности лейкоцитов человека
  8. Лабораторная работа 4-2 Твердофазный непрямой иммуноферментный анализ
  9. Лабораторная работа 1-1 Выделение органов и тканей иммунной системы
  10. Лабораторная работа 3-3 Определение фагоцитарной активности нейтрофилов и макрофагов