Лабораторная работа 3-1
1. 1х106 КМ инкубируют в среде, содержащей изотоп Na251Cr04 (37х105 Bq или 100 мкКю, специфическая активность 5 мкКю/моль), при 37 °С в течение 1—1,5 ч, после чего тщательно отмывают от не вошедшего в клетки изотопа.
2. КМ подсчитывают и раскапывают в подобранной дозе в лунки культуральных круглодонных микропланшетов.
3. В те же лунки вносят КЭ. Соотношение КМ и КЭ обычно составляет от 1:10 до 1:500 в пользу КЭ.
4. Плашки подвергают мягкому центрифугированию — 150 g в течение 1 мин, после чего помещают в С02-инкубатор при 37 °С на 4—6 ч.
5. По завершении культивирования плашки центрифугируют при 250 g в течение 5 мин для плотного осаждения клеток.
6. Супернатанты собирают в специальные пробирки, в которых радиоактивность подсчитывают в у-счетчике.
7. В качестве контроля используют:
а) лунки с КМ, в которые не вносят КЭ, — это контроль спонтанного выхода метки;
б) лунки с КМ, в которые вместо КЭ вносят детергент Triton Х-100 1% (v/v), — это контроль максимально возможного высвобождения метки из КМ.
![]() | ![]() | ![]() |
Цитотоксичность в опытных лунках рассчитывают обычно по следующей формуле:
где СРМ — это число импульсов в минуту соответственно в экспериментальных лунках (СРМ„), в лунках со спонтанным высвобождением метки (СРМспонтанно) и в лунках с максимально возможным высвобождением метки (СРМ,^.
Еще по теме Лабораторная работа 3-1:
- Лабораторная работа 2-1
- Лабораторная работа 2-3
- Лабораторная работа 3-2
- Лабораторная работа 2-2 Постановка метода Рекалде
- Лабораторная работа 7-2 Определение активности интерферона
- Лабораторная работа 7-3 Определение МИФ-активности
- Лабораторная работа 3-4 Оценка фагоцитарной активности лейкоцитов человека
- Лабораторная работа 4-2 Твердофазный непрямой иммуноферментный анализ
- Лабораторная работа 1-1 Выделение органов и тканей иммунной системы
- Лабораторная работа 3-3 Определение фагоцитарной активности нейтрофилов и макрофагов
- Лабораторная работа 7-1 Определение биологической активности ИЛ-1 по комитогенному действию на пролиферацию тимоцитов мышей
- Лабораторная работа 4-1 Определение уровня IgM, IgA и IgG в сыворотке человека методом радиальной иммунодиффузии
- Лабораторная работа 3-5 Получение супернатанта, содержащего цитокины и другие биологически активные молекулы из моноцитов периферической крови человека
- НАДЛЕЖАЩАЯ ЛАБОРАТОРНАЯ ПРАКТИКА (GLP
- Лабораторные тесты
- Лабораторные исследования