<<
>>

Лабораторная работа 2-3

1. Получают гепаринизированную периферическую венозную кровь (20—25 ЕД гепарина на 1 мл крови) в объеме 5 мл.

2. Лейкоциты выделяют из периферической крови. Для этого добавляют в пробирку 0,3% раствор желатины, перемешивают и инкубируют в термостате 30 мин при 37 °С для осаждения эритроцитов.

Собирают лейкомассу. Клетки отмывают полной культуральной средой, центрифугируя при 1000 об/мин в течение 10 мин. Процедуру отмывки проводят дважды.

3. К клеточному осадку добавляют 50 мкл полной культуральной среды. Затем в каждую пробирку вносят по 50 мкл предварительно разведенного образца нужных моноклональных антител (монАТ), меченных флуорохромами. Одна пробирка (контроль) содержит только клетки и полную культуральную среду.В остальные пробирки добавляют монАТ — CD3, CD4, CD8, CD19 и другие в зависимости от цели эксперимента.

4. Пробирки инкубируют 30 мин при 4 °С.

5. Клетки отмывают от излишних монАТ в полной культуральной среде центрифугированием при 1000 об/мин в течение 5 мин.

6. Оставшиеся в пробе эритроциты лизируют, добавляя к клеточному осадку лизирующий раствор, состоящий из 0,8% раствора NH4C1, 0,1% раствора NaHC03, 0,0037% натриевой соли ЭДТА (pH = 7,2-7,4).

7. Проводят встряхивание проб на шейкере 1 мин.

8. Образцы центрифугируют 5 мин при 1000 об/мин. Надосадочную жидкость сливают, добавляют полную культуральную среду и повторяют центрифугирование в том же режиме.

9. Для фиксации меченых клеток в каждую пробу добавляют по 100 мкл 2% параформальдегида и инкубируют 30 мин при 4 °С.

10. Анализ образцов проводят на проточном цитометре.

Содержание основных субпопуляций лимфоцитов в периферической крови здоровых людей представлено в табл. 2.2.

<< | >>
Источник: Ковальчука, Г. А. Игнатьевой, Л. В. Ганковской. Иммунология : практикум : учеб, пособие. — М.: ГЭОТАР- Медиа,2010. 2010

Еще по теме Лабораторная работа 2-3:

  1. Лабораторная работа 2-1
  2. Лабораторная работа 3-1
  3. Лабораторная работа 3-2
  4. Лабораторная работа 2-2 Постановка метода Рекалде
  5. Лабораторная работа 7-2 Определение активности интерферона
  6. Лабораторная работа 7-3 Определение МИФ-активности
  7. Лабораторная работа 3-4 Оценка фагоцитарной активности лейкоцитов человека
  8. Лабораторная работа 4-2 Твердофазный непрямой иммуноферментный анализ
  9. Лабораторная работа 1-1 Выделение органов и тканей иммунной системы
  10. Лабораторная работа 3-3 Определение фагоцитарной активности нейтрофилов и макрофагов
  11. Лабораторная работа 7-1 Определение биологической активности ИЛ-1 по комитогенному действию на пролиферацию тимоцитов мышей
  12. Лабораторная работа 4-1 Определение уровня IgM, IgA и IgG в сыворотке человека методом радиальной иммунодиффузии
  13. Лабораторная работа 3-5 Получение супернатанта, содержащего цитокины и другие биологически активные молекулы из моноцитов периферической крови человека
  14. НАДЛЕЖАЩАЯ ЛАБОРАТОРНАЯ ПРАКТИКА (GLP
  15. Лабораторные тесты
  16. Лабораторные исследования
  17. Лабораторные показатели