<<
>>

Лабораторная работа 2-1

1. 10 мл гепаринизированной крови человека (20—25 ЕД гепарина на 1 мл крови) разводят в 3 раза (1 часть крови и 2 части питательной среды 199).

2. Разведенную кровь наслаивают на раствор фиколл-урографина (плотность 1,077 г/см3) в соотношении 1:3 (1 часть фиколла и 3 части разведенной крови).

Кровь остается над раствором фиколла и не смешивается с ним.

3. Проводят центрифугирование при комнатной температуре в течение 45 мин на центрифуге с горизонтальным ротором при 400 g.

Следует иметь в виду, что для определения необходимого числа оборотов в конкретных условиях центрифугирования или получения соответствующего центробежного ускорения одну из необходимых величин (ускорение или число оборотов) находят по формуле:

g = 1,1 х п2 х г х 105,

где g — центробежное ускорение; п — число оборотов в минуту; г — радиус от центра оси до границы разделяемых сред.

4. После центрифугирования собирают интерфазное кольцо, содержащее мононуклеарные клетки, в отдельную пробирку. Эритроциты склеиваются фиколлом и оседают на дно пробирки вместе с гранулоцитами (см. рис. 2.2).

5. Суспензию мононуклеарных клеток трижды отмывают средой 199, центрифугируя по 10 мин при 200 g.

6. Клетки ресуспендируют в 1 мл культуральной среды. Подсчет клеток осуществляют в камере Горяева. Жизнеспособность клеток определяют с помощью 0,1% раствора трипанового синего. Необходимо подсчитать процент выхода жизнеспособности клеток (более 90%). Для этого подсчитывают начальное количество клеток и количество выделенных клеток.

Процент выхода лимфоцитов = Количество выделенных клеток х iqq%

Исходное количество клеток

<< | >>
Источник: Ковальчука, Г. А. Игнатьевой, Л. В. Ганковской. Иммунология : практикум : учеб, пособие. — М.: ГЭОТАР- Медиа,2010. 2010

Еще по теме Лабораторная работа 2-1:

  1. Лабораторная работа 2-3
  2. Лабораторная работа 3-1
  3. Лабораторная работа 3-2
  4. Лабораторная работа 2-2 Постановка метода Рекалде
  5. Лабораторная работа 7-2 Определение активности интерферона
  6. Лабораторная работа 7-3 Определение МИФ-активности
  7. Лабораторная работа 3-4 Оценка фагоцитарной активности лейкоцитов человека
  8. Лабораторная работа 4-2 Твердофазный непрямой иммуноферментный анализ
  9. Лабораторная работа 1-1 Выделение органов и тканей иммунной системы
  10. Лабораторная работа 3-3 Определение фагоцитарной активности нейтрофилов и макрофагов