<<
>>

Комплементзависимая цитотоксичность

Микролимфоцитотоксический тест. Этот вариант иммунной цитотоксичности используют в качестве лабораторного теста в трансплантологии для оценки возможного наличия в крови реципиента антител к клеточным антигенам предполагаемого донора.

Тест проводят следующим образом.

1. У реципиента берут периферическую кровь, получают сыворотку и раскапывают, например, двукратные разведения этой сыворотки в лунки планшета.

2. У донора берут периферическую кровь, выделяют из нее лейкоциты или фракцию мононуклеаров (что лучше) и аликвоты клеток, например по 2х105 на лунку, раскапывают в лунки с разведениями сыворотки реципиента.

3. Планшеты инкубируют в С02-инкубаторе при 37 °С в течение 45—60 мин.

4. Затем в лунки добавляют комплемент (заранее оттитрованную сыворотку кролика или морской свинки).

5. Продолжают инкубацию еще 30—45 мин.

6. Поврежденные клетки выявляют по включению суправи- тального красителя — трипанового синего, для чего из каждой лунки берут аликвоту клеток, добавляют к этой аликвоте 0,5% раствор трипанового синего и в камере Горяева подсчитывают число прокрашенных (поврежденных) и непрокрашенных (живых) клеток.

В случае если процент поврежденных клеток достоверно превышает таковой в контроле (т.е.

в лунках, в которые не вносили сыворотку реципиента), то данный донор получает отвод.

После внедрения в клиническую практику трансплантологии этого теста трансплантологи значительно реже сталкиваются со случаями сверхострого отторжения трансплантатов.

В другом варианте микролимфоцитотоксический тест применяют для серологического типирования HLA специфичностей. Основные этапы теста указаны на рис. 3.2 (см. также цв. вклейку). В качестве КМ используют выделенные из крови пациента моно- нуклеарные клетки серотипирования HLA специфичностей класса I или очищенную фракцию В-клеток, например на колонке со стеклянной ватой, для тестирования специфичностей HLA класса И. Клетки инкубируют с панелью стандартных типирующих сывороток и после добавлениия комплемента определяют количество убитых и выживших клеток.

Жизнеспособные лимфоциты (неокрашенные клетки)

Если убито около 90°о лимфоцитов (окрашенные клетки), то тест положителен на антиген HLA класса I

<< | >>
Источник: Ковальчука, Г. А. Игнатьевой, Л. В. Ганковской. Иммунология : практикум : учеб, пособие. — М.: ГЭОТАР- Медиа,2010. 2010

Еще по теме Комплементзависимая цитотоксичность:

  1. ОЦЕНКА КЛЕТОЧНОЙ ЦИТОТОКСИЧНОСТИ
  2. Антителозависимая клеточно-опосредованная цитотоксичность
  3. Определение цитотоксической активности NK-клеток
  4. МЕДИАТОРЫ КЛЕТОЧНОГО ИММУНИТЕТА
  5. Интерлейкины
  6. Вопросы и задания
  7. Синтетические препараты
  8. Колониестимулирующие факторы (см. также разд. 26.2)
  9. Лабораторная работа 3-1
  10. Лабораторная работа 3-2
  11. Оценка цитотоксической активности с использованием проточной цитометрии
  12. 1.2.3. Лимфоциты
  13. Неспецифические механизмы защиты