Комплементзависимая цитотоксичность
Микролимфоцитотоксический тест. Этот вариант иммунной цитотоксичности используют в качестве лабораторного теста в трансплантологии для оценки возможного наличия в крови реципиента антител к клеточным антигенам предполагаемого донора.
Тест проводят следующим образом.
1. У реципиента берут периферическую кровь, получают сыворотку и раскапывают, например, двукратные разведения этой сыворотки в лунки планшета.
2. У донора берут периферическую кровь, выделяют из нее лейкоциты или фракцию мононуклеаров (что лучше) и аликвоты клеток, например по 2х105 на лунку, раскапывают в лунки с разведениями сыворотки реципиента.
3. Планшеты инкубируют в С02-инкубаторе при 37 °С в течение 45—60 мин.
4. Затем в лунки добавляют комплемент (заранее оттитрованную сыворотку кролика или морской свинки).
5. Продолжают инкубацию еще 30—45 мин.
6. Поврежденные клетки выявляют по включению суправи- тального красителя — трипанового синего, для чего из каждой лунки берут аликвоту клеток, добавляют к этой аликвоте 0,5% раствор трипанового синего и в камере Горяева подсчитывают число прокрашенных (поврежденных) и непрокрашенных (живых) клеток.
В случае если процент поврежденных клеток достоверно превышает таковой в контроле (т.е.
в лунках, в которые не вносили сыворотку реципиента), то данный донор получает отвод.После внедрения в клиническую практику трансплантологии этого теста трансплантологи значительно реже сталкиваются со случаями сверхострого отторжения трансплантатов.
В другом варианте микролимфоцитотоксический тест применяют для серологического типирования HLA специфичностей. Основные этапы теста указаны на рис. 3.2 (см. также цв. вклейку). В качестве КМ используют выделенные из крови пациента моно- нуклеарные клетки серотипирования HLA специфичностей класса I или очищенную фракцию В-клеток, например на колонке со стеклянной ватой, для тестирования специфичностей HLA класса И. Клетки инкубируют с панелью стандартных типирующих сывороток и после добавлениия комплемента определяют количество убитых и выживших клеток.
Жизнеспособные лимфоциты (неокрашенные клетки)
Если убито около 90°о лимфоцитов (окрашенные клетки), то тест положителен на антиген HLA класса I
Еще по теме Комплементзависимая цитотоксичность:
- ОЦЕНКА КЛЕТОЧНОЙ ЦИТОТОКСИЧНОСТИ
- Антителозависимая клеточно-опосредованная цитотоксичность
- Определение цитотоксической активности NK-клеток
- МЕДИАТОРЫ КЛЕТОЧНОГО ИММУНИТЕТА
- Интерлейкины
- Вопросы и задания
- Синтетические препараты
- Колониестимулирующие факторы (см. также разд. 26.2)
- Лабораторная работа 3-1
- Лабораторная работа 3-2
- Оценка цитотоксической активности с использованием проточной цитометрии
- 1.2.3. Лимфоциты
- Неспецифические механизмы защиты