<<
>>

Метод DHPLC

Метод DHPLC предложен в 1995 году [635], позволяет в течение 2-3 минут определять однонуклеотидные замены, делеции и инсерции в амплификатах размерами до 1,5 т. п. о. Чувствительность и специ­фичность метода составляют около 95 %.

Метод представляет собой модифицированный вариант метода гетеродуплексного анализа с по­следующим автоматическим учетом результатов при помощи жидкост­ного хроматографа. Согласно методу DHPLC-продукты ПЦР исследуе­мого фрагмента ДНК подвергаются частичной денатурации в растворе с контрольными образцами того же фрагмента в соотношении 1 : 1 пу­тем нагревания смеси до +95 °С с последующим медленным охлажде­нием (ренатурацией). При отсутствии мутаций в изучаемом фрагменте формируется только один тип гомодуплексов, но при наличии мута­ций формируется несколько типов гетеродуплексов и гомодуплексов (рис. 4.6). Возникающие гетеродуплексы значительно менее устойчивы к температурным воздействиям, чем гомодуплексы. Эти отличия и мож­но уловить с помощью жидкостной хроматографии.
Метод позволяет в автоматическом режиме улавливать наличие некомплементарных (не­спаренных) сайтов между опытными и контрольными образцами ДНК. Предварительный подбор оптимальных температур плавления гомо- и гетеродуплексов резко повышает чувствительность метода DHPLC по сравнению с SSCP методом (см. выше) или исходным методом гетеро­дуплексного анализа (см. выше) [133, 278, 429, 566].

Метод DHPLC уже широко применяется для генотипирования од­нонуклеотидных замен (SNP), при первичном анализе полиморфных

CG CG
CG CG
AT GC
GC GC
AT AT
\

Денатурац ия и отжиг

\

Гетеро- и гомо- дуплексы

сайтов в генах-кандидатах, ассоциированных с МФЗ, при изучении молекулярных маркеров и мутаций в Y-хромосоме, для картирования генов с помощью типирования маркерных SNP.

<< | >>
Источник: БарановВ.С.. Генетический паспорт — основа индивидуальной и предик­тивной медицины / Под ред. В. С. Баранова. — СПб.: Изд-во Н-Л,2009. — 528 с.: ил.. 2009

Еще по теме Метод DHPLC:

  1. Традиційні методи контрацепції. Бар’єрні методи контрацепції
  2. Методи підготовки вагітних до родів. Медикаментозні методи підготовки вагітних до родів
  3. Разрабатываемые методы
  4. Функциональные методы
  5. Другие методы лечения
  6. Распространенные методы исследований
  7. Биологические методы
  8. Биологические методы
  9. Метод действия гомеопатии
  10. Определение перфорина методом ELISPOT
  11. 3. НОВЫЕ МЕТОДЫ УСТАНОВЛЕНИЯ СОТРУДНИЧЕСТВА
  12. МЕТОДЫ КОНТРАЦЕПЦИИ