Метод DHPLC

Метод DHPLC предложен в 1995 году [635], позволяет в течение 2-3 минут определять однонуклеотидные замены, делеции и инсерции в амплификатах размерами до 1,5 т. п. о. Чувствительность и специфичность метода составляют около 95 %.

Метод представляет собой модифицированный вариант метода гетеродуплексного анализа с последующим автоматическим учетом результатов при помощи жидкостного хроматографа. Согласно методу DHPLC-продукты ПЦР исследуемого фрагмента ДНК подвергаются частичной денатурации в растворе с контрольными образцами того же фрагмента в соотношении 1 : 1 путем нагревания смеси до +95 °С с последующим медленным охлаждением (ренатурацией). При отсутствии мутаций в изучаемом фрагменте формируется только один тип гомодуплексов, но при наличии мутаций формируется несколько типов гетеродуплексов и гомодуплексов (рис. 4.6). Возникающие гетеродуплексы значительно менее устойчивы к температурным воздействиям, чем гомодуплексы. Эти отличия и можно уловить с помощью жидкостной хроматографии.

Метод позволяет в автоматическом режиме улавливать наличие некомплементарных (неспаренных) сайтов между опытными и контрольными образцами ДНК. Предварительный подбор оптимальных температур плавления гомо- и гетеродуплексов резко повышает чувствительность метода DHPLC по сравнению с SSCP методом (см. выше) или исходным методом гетеродуплексного анализа (см. выше) [133, 278, 429, 566].

Метод DHPLC уже широко применяется для генотипирования однонуклеотидных замен (SNP), при первичном анализе полиморфных

CG	CG
CG	CG
AT	GC
GC	GC
AT	AT

Денатурац ия и отжиг

Гетеро- и гомо- дуплексы

сайтов в генах-кандидатах, ассоциированных с МФЗ, при изучении молекулярных маркеров и мутаций в Y-хромосоме, для картирования генов с помощью типирования маркерных SNP.

<< | >>

↑

Источник: БарановВ.С.. Генетический паспорт — основа индивидуальной и предиктивной медицины / Под ред. В. С. Баранова. — СПб.: Изд-во Н-Л,2009. — 528 с.: ил.. 2009

Еще по теме Метод DHPLC:

- Валеология - Генетика - Гинекология - Заболевания - Микробиология - Справочники - Терапия и уход -

- Гомеопатия в медицине - Диетология - Защита от несчастных случаев - Здравоохранение - Иммунология - Лекарственные средства - Нетрадиционная медицина - Основы экономической фармации - Педиатрия - Первая помощь - Психология - Тактическая медицина - Фармация - World-Books.biz